ELISA: декодиране, методи

С развитието на такива свързани науки като генетиката, молекулярната биология, химията, както и с развитието на техническия прогрес, съвременната медицина може да се похвали с иновативни методи за диагностициране на различни човешки заболявания. Те се отличават с висока точност на резултатите и безопасност на работата. Един от тези начини за идентифициране на здравословни проблеми е ензимен имуноанализ. През последното десетилетие тя е придобила широка популярност и е придобила репутация на високоефективен, надежден и безопасен за пациента метод за откриване на болести дори преди да се появят външни симптоми. Ще обясним ясно какъв е този тип диагноза, какъв е принципът на неговата работа, отбележете предимствата, ориентирайте се към цената на такъв анализ.

Реакцията на организма към патогенна флора

За да разберем как, благодарение на ензимния имуноанализ, лабораторните техници диагностицират различни заболявания, е необходимо да се разбере физиологичният процес, който се случва в организма по време на инфекцията. Когато патоген влиза в кръвния поток, човешка имунна система демонстрира защитна реакция под формата на освобождаване на определени вещества - антитела. Те се свързват с клетката и анализират дали тя е част от тялото или е включена отвън. ако имунната система определи, че клетката е чужда, тогава количеството на антителата започва да се увеличава, за да се пребори с патогенния микроорганизъм.

Антителата са от различен тип, имат свои собствени характеристики. Някои вещества се появяват директно по време на периода на инфекция, други остават през целия живот в човешкото тяло и благодарение на тях те развиват силен имунитет към определено заболяване. Протеиновите структури се разделят на такива видове: A, D, E, M, G. В медицината антителата се наричат ​​имуноглобулини. Поради това е обичайно да се обозначават характеристиките на тези вещества на латински букви Ig.

ензимен имуноанализ анализ (ELISA) Тя се основава на данни от медицински познания. Използвайки специални антигени в лабораторията, можете да определите присъствието или отсъствието на определени антитела в биологичния материал. Според резултатите от този анализ, лекарят може да постави диагноза, както и да определи не само наличието на патологията, но и продължителността на неговия произход, за да определи нивото на опасност за пациента. В ензимния имуноанализ присъствието на антитела от групите M и G е по-често изследвано.

Какво е ELISA?

В действителност, ензимният имуноанализ не е иновация на съвременното общество. Изобретен е през 80-те години. Но за такива проучвания се изисква тромаво скъпо оборудване. Ето защо, този метод се използва само в специално оборудвани научни лаборатории: той е бил използван за писане на клетки и тъкани. Но по онова време тя не се използва широко в диагностичната медицина, но е било технически трудно и изключително скъпо да се използва. Само с развитието на технологията и изобретението на биополимерните материали, ELISA се подобрява. След това методът се популяризира и придоби увереност в медицинските среди.

Както бе споменато по-горе, този метод включва откриване в биоматериал - кръв, амниотична течност, стъкловидно тяло или цереброспинална течност - определени групи имуноглобулини.

Има изследвания без прилагане на антиген към повърхностния и ензим-свързан имуносорбентен анализ, който включва провеждане на реакцията в специални ямки. Последният метод има по-голяма чувствителност и надеждност, така че те се анализират в медицински лаборатории за откриване на човешки заболявания.

Фаза Имуноанализ

В зависимост от предвиденото заболяване, ензимният имуноаналитичен комплект използва необходимия антиген, който по време на химическа реакция в присъствието на инфекция ще се свърже с патогенната флора. Този процес се нарича провеждане на имунен отговор.

След това, за да се определи визуално резултатът от изследването, се провежда ензимната фаза ELISA. Тя включва оцветяване на материала с помощта на специални реагенти. В това изследване се използват ензими като алкална фосфатаза, пероксидаза и авидин. В зависимост от получения цвят в процеса на извършване на химични реакции и определяне на резултата от ензимния имуноанализ.

Какво е колориметрия?

Анализът на ензимната фаза на диагностиката се извършва по метод, който има името "колориметрия". Факт е, че не само цветът на материала дава информация за инфекцията, но също и за плътността на цвета в резултат на химични реакции. Този индикатор определя концентрацията на патогена. Ако ръчният метод на диагностика се използва по старомоден начин, тогава се създава специална калибрационна графика за определяне на посочените индикатори.

В съвременните лаборатории, ръчният метод рядко се използва днес. За анализа на ELISA се използва специално устройство - колориметър, в който ръчно се задават само параметрите на изследването, а след това устройството автоматично извършва цялата работа, включително графиката.

Методи ELISA

Има директни и индиректни методи на ензимен имуноанализ. Първият тип отнема по-малко време, тъй като има само 3 етапа на изпълнение. Първо, към антигените на изследваните материали се добавят специфични антитела, поставени в специални ямки. След това премахнете излишното количество и извършете ензимната фаза на анализа, като по този начин се получи резултатът.

Косвеният метод се използва много по-често, тъй като има по-висока чувствителност в сравнение с директния метод на диагностика. При неговото провеждане се използва двойно изследване. А именно - първо, антигенът се свързва с немаркирано антитяло и след това с маркираното. Този процес отнема повече време, но резултатът е най-точен.

Реактивни комплекти

Комплектите за имуноанализ се произвеждат от различни производители, в различни нива на подредба. В Русия, признатата компания е Съюзът на биомедицината. Този производител произвежда комплекти от реагенти за изследването чрез метода на ELISA на почти всички общи инфекции в нашите географски ширини, които могат да бъдат анализирани по този начин. В допълнение към самите реагенти, комплектите включват допълнителни материали, които осигуряват безопасността, удобството и скоростта на анализа. Освен това химическите вещества са боядисани в различни цветове, което намалява вероятността от грешки при избора на реагентна лаборатория.

Химико-биологичните комплекти се различават по относителна наличност, която пряко влияе на разпространението и наличността на ензимния имуноанализ за популацията.

Предимства на диагностичния метод

Безспорно ензимният имуноанализ има няколко предимства в сравнение с други диагностични методи:

1. С негова помощ може да се определи дори малко присъствие на патогенни организми, което показва висока чувствителност на теста.
2. Възможността за откриване на заболяването на най-ранен етап, което значително увеличава шанса за успешно възстановяване.
3. Простота и удобство при вземане на биологичен материал. Този анализ се извършва както в частни лаборатории, така и в публични места. Ако е необходимо, медицинската сестра може да вземе материала от пациента у дома.
4. За анализ се изисква много малко количество биоматериал.
5. Бързи резултати. Съвременното медицинско оборудване ви позволява да извършвате анализ в рамките на един ден.
6. Способност за откриване на скрити асимптоматични форми на инфекция.
7. Проучване за достъпност.
8. Ако е необходимо, е възможно провеждането на масови проучвания с този метод.
9. Съществува възможност за проследяване на хода на заболяването и ефективността на предписаното лечение, тъй като е възможно да се извърши ELISA анализ много пъти абсолютно безопасно за пациента.
10. Автоматизация на етапите на анализ, която елиминира човешкия фактор и повишава надеждността на резултатите.
11. Реагентите за извършване на IFA се съхраняват достатъчно дълго - около година.
12. Анализът е възможен при колебания на температурата на околната среда.

Имуноглобулини от група М

Антителата от група М се произвеждат от имунната система веднага след откриването на чужд антиген. Следователно, ако ензимният имуноанализ е завършен чрез откриването на такива вещества в биоматериала, това показва острия стадий на заболяването, първичната инфекция. Имуноглобулините от група М могат да бъдат в тялото до един месец в зависимост от вида на инфекцията. Тогава техният брой намалява до пълно изчезване.

Група G имуноглобулини

Заместена от имуноглобулиновата група М се появява протеинова структура на формата G. Тези вещества произвеждат силен, в повечето случаи, имунитет за цял живот до болестта. Определянето на протеиновата структура на IgG в изследвания материал показва, че организмът преди това се е срещал с патогена и има защитна реакция срещу реинфекцията.

Показания за диагностика

Ензимен имуноанализ се използва за определяне на различни инфекциозни заболявания, хормонални състояния и тестове за алергия. А именно:

• определяне нивото на тироидни хормони;
• показатели за репродуктивен хормонален панел;
• туморни маркери;
• откриват инфекциозни агенти като цитомегаловирус, хепатит, токсоплазма, рубеола, морбили, туберкулоза, хламидия, сифилис, микоплазма, уреплазма, кандида, гиардия и дори HIV;
• диагностицирани автоимунни заболявания. Включително често използвани за изследване на хормоните на щитовидната жлеза ензим-свързан имуносорбентен анализ: TSH, TG, T3 и T4.

В допълнение към диагностичните цели, методът на ензимния имуноанализ се използва в медицински изследвания.

Как се взема материалът?

В повечето случаи за анализ се препоръчва вземане на венозна кръвна проба. След обработка и подготовка на материала за изследването се извършва имуноанализ. кръвен серум или плазма.

Изследването на хормоналния панел изисква специално внимание, тъй като в този случай е изключително важно да се вземат предвид особеностите на приема на материала. Например, диагностицирането на повечето женски хормони на репродуктивната система изисква венозна кръв да се приема в определени дни от менструалния цикъл. Редица други хормони са засегнати от външни фактори: сезонност, време на деня, психологическо състояние на пациента и много други. Без да се вземат предвид специфични фактори, можете да получите фалшив резултат, който ще доведе до обостряне на заболяването или неправилно предписано лечение.

В някои, по-често сложни случаи, за анализ може да е необходима цереброспинална течност, стъкловидното тяло или околоплодната течност на бременна жена. Процедурите за събиране на тези биологични материали носят определен риск, имат противопоказания и период на възстановяване. Ето защо, тя трябва да се извършва само според показанията на лекар и под негов професионален надзор такъв ензимен имуноанализ. В този случай декодирането изисква специално медицинско познание и може да отнеме известно време.

Подготовка за анализ

Ензимният имуноанализ трябва да се проведе, като се спазват всички препоръки, тъй като външните фактори влияят на резултатите от изследването. Например, важно е сутрин да се вземе венозна кръв на празен стомах (до 11 часа). 2 седмици преди планираното събиране на материал, трябва да спрете приема на лекарства, особено хормонални. Няколко дни преди проучването трябва да се въздържат от употребата на алкохол и мастни храни, както и да се премахнат физическите натоварвания, преживявания и стрес.

Резултати от декодирането

Декодирането на резултатите от ензимен имуноанализ изисква специално познаване на особеностите на протеиновите структури (антитела), които са описани по-горе (IgG и IgM). В съответствие с тези данни се анализират изследователските показатели. Таблицата описва опциите, които могат да бъдат получени по време на анализа:

Анализирайки представената таблица, можем да заключим, че в повечето случаи ще са необходими допълнителни изследвания, за да се потвърди диагнозата. Той не може да даде категоричен отговор само на ензимния имуноанализ. Нормата в този случай няма ясни граници: откритите протеини от група G показват само, че организмът е бил подложен на инфекция с определен патоген. Но същият резултат може да покаже наличието на остра фаза - важно е да се сравнят много фактори и показатели, за да се направи правилна диагноза.

Рискови фактори

ELISA е 90% точен. Независимо от това, съществуват рискови фактори, които влияят на изкривяването на диагностичния резултат: неизправност на оборудването, неправилно събиране на материали, съхранение и транспортиране и пренебрегване на други външни фактори.

Не се препоръчва извършване на диагностика след кръвопреливане, хемолиза, хирургична намеса, биопсия или пункция на биологичен материал - това може да повлияе и на резултатите от показателите.

Разходи за анализ

Разходите за диагностично изследване имат голям диапазон и зависят от вида на анализа и антигена, който трябва да се определи, тъй като на базата на тези фактори се изчислява цената на комплектите с реагент и се определя сложността на анализа. Но в повечето случаи ELISA е на разположение на много пациенти. Цената му варира от 300 р. до 2000 p.

ELISA е достъпен, бърз и високоефективен метод за диагностициране на голям списък от заболявания. Но само квалифициран медицински специалист има право да се занимава с тълкуването на резултатите и диагнозата.